（5）如何去除Na+：接着上面的问题，就有用户问，很多蛋白/多肽，如何去除Na+。建议的有效方法是过反渗透膜（透析），把Na+置换掉；懒一点的方法是加甲酸，比如100 uL的移液管滴一滴甲酸到样品瓶中。这样pH大概在2左右，一般都会获得较好的效果。有时，也可以在柱后进质谱离子源之前，通过三通柱后添加一些酸。（注对比：0.3%的甲酸，pH约为1.9；0.1%的甲酸，pH约为3。）
（6）不要只图一次痛快：有些用户为了追求色谱保留，在液质联用时，非要加三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸等。这样也许当时做得高兴了，但仪器会被彻底地污染，做完后会有无穷无尽的残留，怎么洗也洗不掉，只能等工程师来拆仪器洗了。赵老师举了两个生动的例子，再次警示大家要注意。有个用户做氨基糖，色谱没保留，查文献要加1%七氟丁酸，做之前就问，赵老师就提醒他这样不行，以后别人想做负离子就没法用了。但为了自己的课题，那个用户还是冒险用了，用完后负谱就已经全是七氟丁酸的169，本底溶剂都看不见了。还有个用户也是冒险用，做完了，再想做氯霉素负离子，就彻底不行了。所以，这样的情况，真的劝大家不要去尝试，不行就放弃这个实验算了。不能为了一时痛快把整台仪器污染了。
还有用户问三乙胺的问题，赵老师的回答比较幽默：“也能用，就看你忍受不忍受得了。”三乙胺出峰是m/z 102，如果每次都只做m/z 150以上的，就没问题，但如果想看100以内的低分子量区的谱，就全是102。相比来说，三乙胺表现还“仁慈”一点：一周后102还会下去一些；但若是三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸，仪器就被彻底污染了。
其实，采用合适的柱子和梯度，甲酸、乙酸、甲酸铵、乙酸铵等一般都能解决保留的问题，即使对于氨基酸这样的物质。赵老师谈到自己曾做过28种氨基酸的方法，梯度是比较复杂，但都能出来，对反相柱也没有特别的要求。
同时，提醒大家自己注意一下有机溶剂的纯度，用质谱可以很好地测试出来。赵老师做过一些对比的本底实验，有机溶剂的本底差别很大，有些标为色谱纯的，但本底很高，提醒大家注意。为什么有些色谱纯的其实本底很高？因为色谱纯溶剂的检验方法是用UV检测的，但有些厂家不是好好想办法去纯化溶剂，而是针对检测方法去加紫外掩蔽剂。这让笔者不禁想起奥运会上的兴奋剂检测，也常常遇到这类问题；当然，他们加的是质谱掩蔽剂。所以，我们也呼吁更多的分析测试工作者，练就真正的“火眼金睛”，不断探索先进的分析方法，让这些妄图“以假乱真”的产品无藏身之地，肩负起更多的社会责任。
（7）AB质谱的维护：三个月一定要换机械泵的油，最长最长不要超过半年。花费不大，200元就能买一桶，可如果不换带来的危害非常大。赵老师就曾见到一个分子涡轮泵坏的用户，机械泵已经空了，根本就没有前级抽力，压力全在分子涡轮泵上了。这让笔者又不禁想到，开车的人一般都清楚，一定要常检查机油，车还要定期保养，换机滤、空滤。这么昂贵的一台液质联用仪，只要大家平时好好待她，相信她不会让大家失望的。
赵老师还表示，欢迎大家来向他要一些资料，尤其是一些电喷雾基本原理方面的。真正理解了电喷雾的原理，很多问题也就迎刃而解。电喷雾最基本的四个条件是：要有一定的流速、要有电解质、要有高电压形成电场、要有辅助气体。希望大家有时间去好好看看电喷雾的原理。
由于赵老师不仅质谱经验丰富，液相方面也具有及其丰富的经验，所以，大家提问更加踊跃。
（8）ESI电离效率和有机相比例有严格的关系么？有用户问，是否有绝对的一个规律，有机相的比例增大将有利于电离。赵老师明确回答：没有。比如，用户提到曾经听过一个国外的报告，报告人比较了奎诺酮在30％和70％有机相的信号响应，想说明有机相提高将有利于ESI电离。赵老师看来是对此深有研究，他说，奎诺酮这一类药共有13个化合物，在液质联用时，有机相绝不能高过50%，因为如果超过50%，好几个化合物没有保留就出来了。而用户举例的那个报告人，也许是想用直接进样的方法说明，但其实液质联用时不是这么回事儿。由此，赵老师也希望大家要重视一点液相对于质谱的作用。如果液相方面改进一下，有些情况可以获得非常好的效果。因为很多实际问题是需要用液质联用来解决的，而只考虑直接进样的条件是不行的，因为直接进样和液质联用时，质谱的条件是不同的。
由这个问题引发，还有用户问一个关于瑞典某公司Helix柱子的介绍：“通常Helix的洗脱溶剂是40%～67%乙睛或者是用挥发性的缓冲盐，所以Helix在用液质联用时，对亲水性化合物的质谱灵敏度要比反相柱提高10～1000倍。” 赵老师耐心地解释，其它公司的不了解，但Waters公司的Helix柱子只能做一类非常特殊的化合物——有机季铵盐，只对这类物质有保留，因为它是一个纯硅胶柱，没有任何别的基团，在硅胶表面进行了强化处理，可以见水；但只能做有机季铵盐，其它物质没有保留。也许其它公司的Helix在上面又加了一些基团。至于提到质谱灵敏度提高10～1000倍，赵老师表示“这完全没有可比性”，比如有机季铵盐类以前只能用离子色谱做，用反相柱连质谱根本就没有保留，而用了这款专用的柱子就有保留了，可以做质谱了。Waters公司的Helix柱子也只能在酸性条件下做。关心柱子的还问市场上现在已有的pH 1～12的柱子，赵老师认为在碱性条件（比如pH>9）的情况下运行柱子，柱子的寿命还是会比较短。
（9）关于前处理：比如对于血样，如果前处理不干净，磷脂的干扰会很大，会对灵敏度有很大影响。赵老师也做了很多不同前处理方式的比较实验，比如蛋白沉淀离心、液液萃取、SPE等，结果表明SPE的方法还是最好的，可以最大限度地减少离子抑制效应。而对于只愿用蛋白沉淀离心法的用户，还有一个小窍门，就是离心定容后，先放在零下2℃冰箱中冷冻一下（大概半小时），一些磷脂会分出来，把清液抽出来再进样，结果会好很多。分离的形态呈一层薄薄的油状，但常温再放置一段时间又复溶了。
面对如此热烈的问答，主持人只好暂且打断，来进行下一个报告，也希望大家可以在工作中继续探讨更多的典型问题。同时笔者再次由衷地感到，仪器公司里常有很多经验非常丰富的应用专家，他们对多种不同条件下的工作都有很多探索，他们常常具有积极探索的精神，接受各种挑战性项目的勇气，同时又默默无闻，乐于奉献。对他们来说，帮助用户取得事业上更大的成功常会使他们获得巨大的满足。而我们平时总是看到他们日日奔波在外，很多人一年200多天出差、在用户现场为用户排忧解难，比如赵老师就是在非常忙的工作中抽出时间来质谱沙龙，但已经给大家带来了如此多的收获。同时我们也了解到，各大公司对工程师的管理也很规范，获得用户的满意度是对他们个人工作的一个很重要的评价；可有时也会听到一些用户对工程师们的一些抱怨，而有些情况可能仅仅是沟通的问题。所以在此，我们呼吁大家都能更多地理解和尊重工程师们的工作，让出门在外的工程师们，可以更快乐地为用户们奉献。
HPLC/MS在胶类药物质量控制中的应用
来自中科院过程工程所国家生化工程重点实验室的张贵锋博士，为大家介绍了一种新型的中药质控方法，令人耳目一新。他先从“中药现代化”的发展讲起，介绍了一些基本概念，比如：中药包括植物药、动物药、矿物药等5000多种，十五期间我国取得了一系列的中药质量控制的重要进展，出台了一系列的中药质控标准，比如控制终端产品的比较成熟的中药指纹图谱。但中药指纹图谱大都用于植物药，用于动物药存在很多问题。中药指纹图谱方法包括：色谱指纹图谱、光谱指纹图谱、DNA指纹图谱。而动物药分子量很多呈连续分布，没有明显的紫外吸收，亲脂性比较强。动物药的生产工艺不稳定，添加的辅料也不相同，所以导致各个厂家、利用相同的原料生产的同一种动物药光谱性质相差很大。动物药在生产过程中，很多DNA又被破坏掉了。所以传统指纹图谱的色谱、光谱、DNA法应用与动物药都存在问题。所以，开发动物药真伪鉴别的可靠方法非常有意义。
[本文共有 4 页，当前是第 2 页] <<上一页 下一页>>
