【摘要】 目的：建立清脑降压片的阿魏酸含量测定方法。方法：高效液相色谱法，色谱柱：C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸（17︰83）；柱温：35℃；检测波长：316nm；流速：1.0ml/min。结果：方法稳定、重现性好、回收率高、准确可靠。结论：本方法可以作为清脑降压片含量测定的方法。

【关键词】  阿魏酸 清脑降压片 高效液相色谱法 含量测定

　　清脑降压片收载于《中国药典》2005年版一部，是由黄芩、夏枯草、槐米、当归、丹参等13位中药组成的中药复方制剂[1]。临床用于肝阳上亢所致的眩晕，症见头晕、头痛、项强、血压偏高。在标准中并未制定含量测定方法，阿魏酸是当归药材中的有效成分之一，本文参照《中国药典》2005年版一部当归药材项下的含量测定方法以及有关当归含量测定方法的文献[2～3]，通过高效液相色谱法测定样品中阿魏酸的含量，希望以此控制终产品的质量。

　　1  仪器与试剂

　　仪器：岛津-10AtvP，浙江大学N2000色谱工作站，色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，Diamonsil（钻石）-C18（200mm×4.6mm，5μm）（迪马公司提供）。试药；阿魏酸对照品，中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

　　2  色谱条件

　　色谱柱：C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸（17︰83）；柱温：35℃；检测波长：316nm；流速：1.0ml/min。样品中阿魏酸峰与其他峰分离度大于1.5；理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000。

　　3  实验条件的选择

　　3.1  提取溶剂的选择

　　以不同浓度的乙醇、甲醇为溶剂，采用加热回流的提取方法，测定同批样品，结果采用70%甲醇为溶剂，提取较安全。

　　3.2  提取方法及时间的选择

　　以70%甲醇为溶剂，分别加热回流15、30、60、120min，测定同批样品，结果采用加热回流30min为宜，提取较完全。

　　4  线性关系的考察

　　精密量取阿魏酸对照品溶液（10.15mg/50ml）1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置50ml棕色量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl注入液相色谱仪中，记录峰面积积分值。其进样量（μg）与峰面积关系见表1。表1  阿魏酸对照品进样量与峰面积的关系 （略）

　　以阿魏酸对照品的进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=2566022.47X－4009，r=0.99996。结果表明，阿魏酸在0.041～0.203μg范围内线性关系良好。

5  稳定性试验

　　精密吸取同一供试品溶液10μl，分别于配制后0、2、4、8、12h依法测定，计算峰面积积分值，结果见表2。平均值为243487.6，RSD=0.66%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。表2稳定性试验（略）

　　6  精密度试验

　　精密吸取同一供试品溶液，进样10μl，重复进样5次，计算峰面积积分值，结果见表3。平均积分值为243425.8，RSD=0.29%，表明精密度良好。表3  精密度试验结果（略）

　　7  重复性试验

　　取同一批样品5份进行测定，计算含量测定结果，结果见表4，平均值为0.05978，RSD=0.74%，表明重现性良好。表4  重现性试验结果（略）

　　8  回收率试验

　　采用加样回收法，精密称取已知含量的同一批号的样品（0.1983mg/g）0.6g，精密加入70%甲醇20ml，再分别精密加入阿魏酸对照品溶液（0.0203mg/ml）5ml，按供试品溶液制备方法制备及上述色谱条件测定，结果见表5。表5 回收率试验结果（略）

　　9  样品测定

　　9.1  对照品溶液的制备

　　精密称取阿魏酸对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取3ml，置50ml棕色量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含阿魏酸12μg）。

　　9.2  供试品溶液的制备

　　取清脑降压片20片，除去包衣，精密称量，计算平均片重，研细，精密称取1.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。

　　9.3  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，样品含量测定结果见表6。表6 含量测定结果（略）

　　10  讨论

　　清脑降压片原标准中没有含量测定项，本研究制订的阿魏酸的含量测定方法简便易行、重现性好，为清脑降压片质量标准的提高提供了可靠的依据，具有一定的参考价值。

【参考文献】
  　　[1] 中华人民共和国药典，一部[S]．2005．

　　[2] 傅欣彤，刘 颖，张小茜．当归质量标准的研究[J]．中国中医药信息杂志，2003，10（8）：43～44．

　　[3] 郑末晶，杨 静，吴桂芝，等．高效液相色谱法测定当归寄生注射液中阿魏酸的含量[J]．中成药，1999，21（4）：178．