摘要：目的建立反相高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分的含量。方法以标准品丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B为内标,色谱柱: KromasilC18柱(4.6×20 mm,5 μm)；流动相：流动相A：水-二甲基甲酰胺-冰醋酸（90∶4∶2），流动相 B：甲醇。梯度洗脱;流速：1.0 ml/min；检测波长：281 nm。结果丹参素加样回收率为97.59%～101.66%，RSD为1.50%（n=6）；原儿茶醛加样回收率为97.19%～101.25%，RSD为1.90%,（n=6)；丹参酚酸B加样回收率为100.39%～102.11%，RSD为0.6%，(n=6)。结论实验结果表明，该方法操作简便，重现性好,可作为样品的检测方法。

　　关键词：丹参素；    原儿茶醛；    丹参酚酸B  ;  高效液相色谱法 ;   含量测定

　　Determination of Water-solubility Component in Danhong Injection by HPLC

　　Abstract:ObjectiveAn HPLC method was developed to separate and determine salvianic acid , protocatechuic aldhyde and salvianolic acid B in Injection Danhong。MethodsSeparation was performed on an Kromasil C18(5 μm,4.6 mm×20 mm) with water-dimethylformanide -glacial acetic acid (90∶4∶2)as mobile phase and determination at 281nm . ResultsThe recoveries were between 97.59 and 104%. And RSD was not more than 2.0%。Conclusion The method is simple,rapid and reproducible for determination of salvianic acid and protocatechuic aldhyde in Injection Danhong.

　　Key words:Salvianic acid ；  Protocatechuic aldhyde ；   Salvianolic acid B ；   HPLC ；  Determination
   
　　 我医院常用的丹红注射液，已临床使用多年，具有活血化瘀、理气止痛的功效。用于胸中憋闷，心绞痛等症，疗效显著。丹红注射液的君药丹参的主要有效成分为丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分，但目前注射液还没有对此3个成分同时进行含量测定。为了更好的控制本品的质量，本实验采用高效液相色谱 HPLC法分别测定了丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B的含量。

　　1  器材

　　 高效液相色谱仪（日本岛津Agellen；SPD-10AVP紫外检测器；N2000数据处理系统）；KromasilC18柱(4.6 mm×20 mm,5 μm)；丹参素对照品（含测用,上海医科大学药学院）；原儿茶醛对照品（中国药品生物制品检定所,110810-200205）；丹参酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，111562-200302）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，二甲基甲酰胺、冰醋酸等其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统适用性实验［1］用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：水-二甲基甲酰胺-冰醋酸（90∶4∶2），流动相B：甲醇。梯度洗脱的时间和流动相的比例见表1。表1  丹参水溶性成分的流动相（略）

　　2.2  供试品溶液及对照品溶液的制备丹参素对照品溶液的制备：精密称取丹参素对照品10.80 mg于25 ml容量瓶中，加甲醇定容成25 ml，制成每毫升含0.432 mg的丹参素对照品溶液。

　　原儿茶醛对照品溶液的制备：精密称取原儿茶醛对照品7.10 mg于10 ml容量瓶中，加甲醇定容成10 ml，制成每毫升含0.71 mg的原儿茶醛标准溶液。

　　丹参酚酸 B对照品溶液的制备：精密称取丹参酚酸 B对照品9.95 mg于25 ml容量瓶中，加甲醇定容成25 ml，制成每毫升含0.398  mg的丹参酚酸 B对照品溶液。

　　混合标准溶液的制备：精密吸取以上各对照品溶液各5 ml，混匀，作为混合对照品溶液。

　　丹参供试品溶液制备：取丹红注射液适量，加水稀释后，即得丹参药材供试品溶液。

　　2.3  专属性考察在选定条件下，供试品中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B可与其它组分基线分离，与邻近色谱峰的分离度 R＞1.5，按丹参素峰计算理论板数 n为3 000。将丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B对照品溶液、丹参药材供试液在上述条件下进样，图谱见图1~2。

2.4  线性范围的考察精密吸取混合对照品溶液（丹参素0.432 mg/ml，原儿茶醛0.71 mg/ml，丹参酚酸 B0.398 mg/ml）2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 ，14 μl依次进样，在上述色谱条件下进行测定。记录色谱图，分别以各标准品的峰面积为纵坐标，对照品的含量为横坐标，回归方程得：丹参素线性方程为：y=636x－6.466，r=0.999 9，丹参素在0.864 ～6.048 μg范围，峰面积值与进样量有良好线性关系。原儿茶醛的标准曲线 y=3345.4x＋4.65，r=1，原儿茶醛的进样量在0.071 ～0.497μg范围内，峰面积值与进样量有良好线性关系。丹参酚酸B的标准曲线为 y=234.34x－26.2，r=0.9 999，丹参酚酸 B的进样量在0.796～5.572 μg范围内，峰面积值与进样量有良好线性关系。

　　2.5  精密度实验取同一份丹参水溶性对照品溶液，重复进样5次，测得峰面积值，丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B三者的 RSD分别为0.12%,0.18%，0.26%。因此可知三者的精密度均良好。

　　2.6  重现性实验取同一批号（051201）丹红注射液5份，适量，分别精密称定，同前述方法制备供试液，进样，测定结果丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B的 RSD分别为0.13%，0.36%和0.92%结果表明，该方法重现性良好。

　　2.7  稳定性实验对同一份供试品和对照品溶液，按上述方法每隔2 h测定1次，结果 RSD在0.12%～0.86%之间，说明丹参对照品与丹红注射液供试液在8 h内较为稳定，可以满足测定的需要。表2  加样回收率测定样品中含量（略）
 
　　结果表明，加样回收率在97.19%~102.11%之间，丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B平均回收率分别为98.18%，99.2%，101.5%，符合含量测定的要求。

　　2.8  加样回收率实验精密称取已知含量的供试品（丹参素含量为8.068 7 mg/g，原儿茶醛的含量为1.386 6 mg/g,丹参酚酸B的含量为6.444 0 mg/g）1 g，共6份，加水稀释后，按上述方法制备供试液，测定峰面积，计算含量，以下式计算回收率，结果见表2。

　　2 .9  样品测定取3批丹红注射液，按上述方法测定，结果见表3。表3  丹红注射液中水溶性成分的含量（略）
 
　　由表3可知，丹红注射液中含丹参素约为8.317 mg/ml，含原儿茶醛约为1.343 mg/ml，含丹参酚酸B约为6.443 mg/ml。

　　3  讨论

　　3.1  丹参素、原儿茶醛与丹参酚酸B极性相差较大，出峰的时间相差也较大，为了能采用一种流动相同时测得3种成分，并缩短出峰时间，故采用梯度洗脱的方法进行。

　　3.2  丹参酚酸B在湿热的作用下，会分解生成丹参素、原儿茶醛等［2］，长时间放置，特别是在温度较高的环境中，丹参酚酸 B的峰面积下降较快，因此，丹红注射液要在阴凉干燥库保存。并建议在丹红注射液中，增加丹参酚酸B的含量测定项。

　　参考文献：

　　［1］张文生，李德坤，叶正良. 丹参提取物丹参素、原儿茶醛和丹酚酸 B的含量测定［J］.药物分析杂志，2003,23（6）：475..

　　［2］毛声俊，侯世祥，唐昌炯，等.丹参素在加温加速条件下的含量变化规律研究［J］.中国中药杂志，2003，28（3）：220.