1. 目的
     规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
2. 范围
     本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
3. 职责
     质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成
     本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、UPS和通风柜等辅助设备。
5. 程序
5.1. 准备
5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2. 开机和泵操作
5.2.1. 开机
5.2.1.1. 接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目，右击『Run Samples』图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。
5.2.2. 更换溶剂
5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；
5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；
5.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；
5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；
5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；
5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；
5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；
5.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
5.2.2.9. 重复5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即将使用的溶剂更换完毕。
5.2.3. 排气泡
5.2.3.1. 打开参照阀，换流动相为100%超纯水，设流速为10ml/min（注意：确认参照阀是打开的，否则可能损坏安装好的柱）；
5.2.3.2. 转动进口集合管阀手柄至DRAW位置，用启动注射器抽出约10ml水；
5.2.3.3. 顺时钟转动手柄至INJ位置，缓慢用力使水通过泵头从参照阀出口管排出（注意不要将气泡注入泵中）；
5.2.3.4. 按［Stop flow］屏幕键停泵，关上参照阀。
5.2.3.5. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为10ml/min，冲洗2~5min（或更长时间）后停泵，重新接上柱。
5.3. 平衡系统（分两种情况进行）
5.3.1. 等度模式
5.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超纯水冲洗系统10min。
5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。
5.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的5~10%以内。如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。
5.3.1.4. 压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少5~6倍柱体积的流动相通过系统。
5.3.1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法，按「Monitor」（此后泵由软件控制），观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移<10-3Au/min，噪声为10-4Au数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
5.3.1.6. 按「Abort」图标（左上第五），停止监视基线。
5.3.2. 梯度模式
5.3.2.1. 按检验方法规定的条件冲洗平衡系统，并注意压力波动变化和排气泡。
5.3.2.2. 在进样前运行1~2次空白梯度。
5.4. 进样
5.4.1. 在QuickSet窗口内左下部选〈Single〉标签，在Sample Name档内填写试样名称；在Function档内选择试样类型（标准选“Inject Standards”；样品选“Inject Samples”）；在Method Set档内选择所需的方法组；在Injection Volume档内输入进样体积；在Run Time档内输入记录时间。
5.4.2. 用针头滤器过滤试样溶液（注射液可不必过滤），用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
5.4.2.1. 如按部分装液法，用微量注射器定容进样时，进样量应不大于定量环体积的50%，并要求每次进样体积准确、相同；
5.4.2.2. 如按完全装液法，用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的3倍（5~10倍准确性更佳）。
5.4.3. 按〈Single〉标签内右边的进样(Inject)按钮，等待窗口底部状态档内显示“Waiting”后，方可进样。
5.4.4. 将进样阀手柄转动至Load位置，将注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样溶液，除另有规定外，让注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动运行，采集数据并记录图谱。
5.4.5. 让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前1~2min切换回Load位置，将注射器从进样阀中拔出。
5.4.6. 先用水再用试样溶液清洗注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。
5.5. 数据处理（外标法）和打印
5.5.1. 右击系统主界面下的『Browse Project』图标，选择相应的项目，按「OK」进入Project窗口，选〈Channels〉标签。
5.5.2. 建立处理方法　选择一个待积分的标准，右击后选“Review”进入Review窗口。按「Processing Method Wizard」图标（左边第一个）进入New Processing Method向导窗口，按「OK」。
5.5.2.1. 划入一个感兴趣的最窄的峰，按「Next>」；
5.5.2.2. 划入一段包含噪声的基线，按「Next>」；
5.5.2.3. 划入一段要积分的区间，按「Next>」；
5.5.2.4. 根据情况选择最小峰面积和最小峰高，按「Next>」、「Next>」；
5.5.2.5. 在Name档内输入各组分峰的名称，按「Next>」、「Next>」；
5.5.2.6. 在Method Name档内填写方法名称，按「Finish」。退出Review窗口。
5.5.3. 修改标准　选中所有标准，右击后选“Alter Sample”进入Alter Sample窗口。
5.5.3.1. 在Sample Type档内将Unknown改成Standard；
5.5.3.2. 按「Amount」图标（左上第六个）进入Component Editor窗口；
5.5.3.3. 按「Copy from Process Method」图标（左上第五个），选择刚建立的处理方法，按「Open」，在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；
5.5.3.4. 按「Save」图标存盘，退出Alter Sample窗口。
5.5.4. 积分　先选中所有标准，再选中所有未知样品，右击后选“Process”进入Background Processing Reporting窗口，选Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按「OK」。
5.5.5. 打印　在Project窗口下选〈Results〉标签。
5.5.5.1. 选中要打印的标准/样品，右击后选“Preview”进入Open Report Method窗口，选合适的打印方法，按「OK」进入Report Publisher
(Preview)窗口，预览打印的结果。按打印(Print)图标（左上第二个）即可打印结果。
5.5.5.2. 按「Close」可进入Report Publisher窗口对报告方法进行修改，完成后按「Print」图标（右数第二个）即可打印结果。
5.5.6. 数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系统，关闭Millennium32软件，再依次关闭电脑主机、显示器、打印机。
5.6. 清洗系统和关机
5.6.1. 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。
5.6.2. 清洗进样阀
5.6.2.1. 用启动注射器吸10ml超纯水；
5.6.2.2. 将注射针导入口冲洗头（Rheodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上（不要针），并将它们一起接到进样口上；
5.6.2.3. 使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。
5.6.3. 清洗柱
5.6.3.1. C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。
5.6.3.2. Protein PAK60柱先用超纯水冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min。
5.6.4. 用水冲洗柱后，分别用20ml超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。
5.6.5. 清洗完成后，先将流速降到0，再依次关闭泵、脱气机、UPS，断开电源。
5.6.6. 填写使用记录。