摘要：目的测定炎可宁中有效成分-黄芩苷的含量。方法反相高效液相色谱法：色谱柱为Kromasil  C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相为甲醇-水-磷酸（60∶40∶0.2）；检测波长：280 nm；流速：1.0 ml・min-1；柱温：30℃。结果建立了对炎可宁片中黄芩苷进行定量的测定方法，并将此方法用于3个不同厂家生产的炎可宁片中黄芩苷含量的测定。结论   为中药复方提供了更加简便、合理、可靠的质控方法。

关键词：反相高效液相色谱法；  炎可宁；  黄芩苷

　　Determination of Baicalin in Yankening by RP-HPLC

　　Abstract：ObjectiveTo determine the bioactive compound's content of baicalin in Yankening. MethodsRP-HPLC,Kromasil C18 column(4.6 mm×150 mm,5 μm) with methanol-water-phosphoric acid(60∶40∶0.2) as mobile phase. The flow rate was 1ml/min,the column temperature was 30℃and detection was effecive at 280 nm. ResultsThis method was applied to determine baicalin in Yankening produced by different factories successfully. Conclusion This is a more convenient, reasonable and credible quality control method for the Chinese traditional medicine.

　　Key words：RP-HPLC；  Yankening；  Baicalin
   
　　炎可宁为国家准字号中成药，由黄连、黄柏、板蓝根、大黄、黄芩等5味中药组成，主要用于清热泻火，消炎止痢。作为处方中的主药黄芩性苦寒，具有清热燥湿，泻火解毒，止血安胎的作用［1］，所含黄芩苷（结构式见图1）是一种黄酮类化合物，有抗炎、抗菌、解热等作用［2］。以黄芩苷为定量监控指标可有效地控制产品质量。有关黄芩苷的含量测定方法有比色法［3］、分光光度法［4］、薄层扫描法［5］、高效液相色谱法［6］等。在《中国药典》中对炎可宁中黄芩苷含量的测定还没有记载，本文研究了利用反相高效液相色谱法测定了3个不同厂家生产的炎可宁片中黄芩苷的含量。本法具有操作简单、准确、重现性好等优点，同时也为中药复方提供了更加简便、合理、可靠的质控方法。

　　1  仪器与试剂

　　美国Waters公司高效液相色谱仪（带有Waters 1525液相泵，Waters 2996二极管阵列检测器），超声波清洗器（KQ-250A，昆山市超声波仪器厂），上皿电子天平（FA2004，上海天平仪器厂），TG328B分析天平（上海天平仪器厂），低速离心机（北京医用离心机厂）。

　　图1  黄芩苷结构式（略）

　　对照品：黄芩苷（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。炎可宁片（市售），甲醇（天津市光复精细化工研究所，色谱纯），无水乙醇（沈阳新兴试剂厂，分析纯），甲醇（沈阳市合富化学试剂经销厂，分析纯）高锰酸钾（丹东市胜利化工厂），二次蒸馏水（自制）。

　　2  方法与结果

　　2.1  溶液的制备对照品溶液的制备：精密称量干燥至恒重的黄芩苷对照品25 mg置于50 ml容量瓶中，用50％甲醇进行溶解，并超声处理20 min，水浴（50℃）10 min，冷却至室温，再用50％甲醇定容至50 ml，摇匀，即得0.5 mg/ml的黄芩苷贮备液。准确吸取贮备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml，分别置于10 ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，所得对照品的浓度分别为25，50，100，150，200 μg/ml。样品溶液的制备：精密称取除去糖衣的3个厂家的炎可宁样品，加入甲醇30 ml，超声处理20 min，放置至室温，再用离心机以3 500 r/min的速度离心15 min，取离心液5.0 ml，用甲醇稀释至10 ml，即得样品溶液。

　　2.2   色谱和检测条件色谱柱：Kromasil  C18分析柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)；流动相：甲醇水磷酸（60∶40∶0.2）；检测波长：280 nm；流速：1.0 ml・min-1；柱温：30℃；进样体积：10 μl。

2.3  线性关系的考察在上述条件下，黄芩苷分别在5个浓度点，平行测定3次（均进样10 μl）。以峰面积为纵坐标，对照品浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线如图2所示；回归方程为：C=2.986 9×10-5A+4.088 75, r=0.999 5；黄芩苷在25～200 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

　　2.4  精密度实验精密吸取黄芩苷对照品溶液，重复进样5次，每次进样体积为10   μl。测定峰面积分别为：5 613 129，5 684 194，5 537 458，5 736 715，5 665 029，5 647 305。RSD为1.3%。

　　2.5  回收率试验取已知含量的样品溶液1.0 ml，分别加入对照品溶液1.0 ，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，按样品测定法，用上述色谱条件测定，所得结果见表1所示，表明回收率良好，满足定量要求。

　　表1  加样回收率实验结果（略）

　　2.6  样品中黄芩苷含量测定将样品溶液经0.45 μm滤膜过滤直接进样，分别定量测定黄芩苷的含量。结果见表2。

　　表2  3种炎可宁中黄芩苷的含量（略）

　　三种样品的色谱图如图2~5所示。

　　图2  黄芩苷标准曲线（略）

　　图3  样品1的HPLC图（略）

　　图4  样品2的HPLC图（略）

　　图5  样品3的HPLC图（略）

　　3  讨论

　　3.1  由于黄芩苷在水和甲醇中的溶解度较小［1］，因此配制黄芩苷标液时，其浓度不宜过大，为了加速溶解，最好经超声处理，而且要将样品研细，并要不断振荡。

　　3.2  在配制黄芩苷标样的过程中，曾经尝试用不同的溶剂来溶解黄芩苷，分别为甲醇水冰醋酸（47∶53∶0.1），甲醇水磷酸（60∶40∶0.2），甲醇（分析纯），50％甲醇，经过比较，得出由50％甲醇溶解效果最好，由此而得的标准曲线的线性范围最好。

　　3.3  流动相：以甲醇水冰醋酸（47∶53∶0.1）和甲醇水磷酸（60∶40∶0.2）进行实验对比，得出甲醇水磷酸（60∶40∶0.2）的分离效果较满意。

　　3.4  黄芩是炎可宁的主要成分，所含黄芩苷有抗炎、抗菌、解热等作用。因此以黄芩苷为定量监控指标可有效地控制产品质量。中成药中黄芩苷的测定方法很多，如比色法、分光光度法、薄层扫描法、二阶导数光谱法、高效液相色谱法等。本文利用高效液相色谱法测定炎可宁中黄芩苷的含量，通过线性关系的考察、精密度实验、回收率实验等一系列实验，也证明了高效液相色谱法具有速度快、准确性高、分离效果好等优点，所得结果与炎可宁中黄芩苷实际含量基本一致。

　　3.5  《中国药典》中对炎可宁中黄芩苷含量的测定没有记载，有关对中成药炎可宁中黄芩苷含量的测定至今未见报道。用本实验方法测定了不同厂家生产的炎可宁片中黄芩苷的含量，结果也证明了此种方法的简单、快捷、准确,更适合制剂中黄芩苷含量测定。

　　参考文献：

　　［1］  国家药典委员会.中国药典［S］. 北京：化学工业出版社，2000：248 .

　　［2］  季宇琳.中药有效成分药理与应用［M］.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1995：60.

　　［3］  张乃吉，王  健，赵岚峰，等.茵栀华工内注射液质量标准的探讨［J］.中成药，1991，13（11）：11.

　　［4］  石淑琴，郭  军.二阶导数法测定双黄连注射液中黄芩苷的含量［J］.中成药，1992，14（5）：10.

　　［5］  胡  斯，张武标，王申东等.薄层扫描法测定复方逍遥散合剂中黄芩苷的含量［J］.中成药，2000，22（8）：584.

　　［6］  何锦丽.HPLC法测定小柴胡胶囊中黄芩苷的含量［J］.中成药，2000，22（8）：592.