1、试剂
1.1甲醇 分析纯。
1.2磷酸 分析纯。
1.3乙腈 色谱纯。
1.4硫酸月桂脂钠（Sodium Dodecylsulfate）、1－癸烷磺酸钠（Sodium 1－Decanesulfonate）  液相色谱 用。
1.5标准溶液 准确称重已测定水分的盐酸硫胺素（VB1）和盐酸吡哆醇（VB6）标准品各0.0500g，溶于水中，准确配成50ml溶液。此溶液为标准溶液A。准确称量已测定水分的烟酰胺和烟酸标准品0.0400g，溶于水中，准确配成20ml溶液。此溶液为标准溶液B。准确称量经80℃干燥4h的咖啡因0.0500g，准确加入标准溶液A5ml标准溶液B10ml，再加入甲醇：水：磷酸＝100：400：0.5混合溶液，并稀释至20ml作为标准溶液，此溶液每ml含VB15μg，VB65μg，烟酸20μg，烟酰胺20μg，咖啡因50μg。
2、仪器设备
2.1高效  液相色谱 仪：附紫外检测器。
2.2  超声波清洗 器。
2.3离心机。
3、分析步骤
3.1准确称取一定量片剂粉末或胶囊内容物于试管中，加入甲醇：水：磷酸＝100：400：0.5混合溶液，使浓度为每毫升中大约含VB1、、VB60.25mg，烟酸、烟酰胺1mg。超声提取5min后以3000rpm/min离心5min，上清液经0.45μm滤膜过滤后待进样。
3.2液体样品直接以甲醇：水：磷酸＝100：400：0.5混合溶液稀释，充分混匀后经0.45μm滤膜过滤后待进样。
3.3色谱条件
3.3.1色谱柱：TSK C18　　4.6×150ｍｍ
3.3.2柱温：室温
3.3.3检测波长：VB１　　260ｎｍ
3.3.4灵敏度：0.02AUFS
3.3.5流动相：VB１：硫酸月桂脂钠溶液（5□530）：乙腈：磷酸＝530：470：1
　　　　　　咖啡因、烟酸、烟酰胺、VB6：1-癸烷磺酸钠溶液（1.22□850）：乙腈：磷酸＝850：150：1
3.3.6流速：1ml/min
3.3.7进样量：10μL
3.3.8色谱分析：量取10μL标准溶液及试样净化液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。