螺旋霉素是多组份大环内酯类抗生素，其主要成份有螺旋霉素I、螺旋霉素II、螺旋霉素Ⅲ。它是生产乙酰螺旋霉素的主要原料。螺旋霉素的组份测定，原有检验方法的分离效果不是很理想。本文采用双泵同时抽取流动相的高效液相色谱法来分离测定螺旋霉素，获得了满意的分离效果。
实验部分
一、仪器与试剂：
Waters高效液相色谱仪：
510泵（2个）
Waters 680梯度控制仪
490E紫外检测器
Waters 745积分仪
螺旋霉素：为北京抗生素研究所精制的对照品
二、色谱条件：
色谱柱：YWG C8（10微米 直径4×300mm）（大连化学物理研究所）
流动相：A：0.02mol/l MH4Ac
B：乙腈（色谱纯）
流速：2.0ml/min
检测：UV-232nm（0.5AUFS）
柱温：室温
三、方法与结果
1．检测方法：将流动相A、B分别用微孔滤膜过滤，超声波脱气，备用。将流动相A置于A泵进液管，流动相B置于B泵进液管，用梯度控制仪控制：流动相A：流动相B=47：53。将螺旋霉素配成1mg/ml的溶液（用流动相稀释），进样量：10ul
2．定量分析：在上述色谱条件下进行分析，记录色谱图，采用归一法，计算面积%。
四、讨论：
原测定方法，流动相为：乙腈：0.1mol/l NH4Ac：水=53:10:37，其它一致。
1．方法色谱图对比：从图谱上可产看到，改进后，使峰形规范了。
2．两方法分离效果对比：原方法螺旋霉素I与螺旋两组份分离到R为0.75，改进后，螺旋霉素I与螺旋霉素II两组份分离度R为1.55，可见，改进后提高了分离效果。
3．两方法重现性对比：由于原方法分离度达不到要求，积分误差较大，所产重现性较差，相对偏差为3-5%。改进后，重现性较好，其相对偏差小于2%，精密度能达到要求。
