摘要 目的：测定头孢克洛胶囊中头孢丸洛的含量。方法：高效毛细管电泳法。毛细管柱(60 cm×75μm)，以30mmol／L硼砂为运行缓冲液(pH=9．2)，高压进样5 s，分离电压为12 kV，温度为25℃，检测波长为254 nm，以地塞米松磷酸钠为内标。结果：头孢克洛在6～30℃g／mL
浓度范围内线性关系良好(r=0．999 6)，平均回收率为99．20％(n=5，RSD=2．03％)。结论：高效毛细管电泳法简单、快捷、灵敏。
关键词 头孢克洛；高效毛细管电泳法；含量测定

Determination of Cefaclor in Cefaclor Capsule by HPCE
Guo Dan1．Chen Nana2。Yang Xixiaol，Xiao Xiaoyanl Chen Zhiliangi 1.Pbztrmaceutical Department of Nanfang Hospital，First Military Medical University,Guangzhou，Guangdong,China 510515；2．Institute of Pharmaceutical Sciences，First Military Medical University，Guangzhou，Guangdong,China 510515)

Abstract Objective：To determine the content of cefaelor in cefaelor capsule．Methods：HPCE was used．The best condition was achived with a fuse dsilca capillary tube(60 em×75μ m)，30 mmol／L sodium tetraborate deeahydrate buffer(pH=9．2)，at a constant voltage of 12 kVand temperature at 25℃ ．The UV detection wavelength was at 254 nm and dexamethasone sodium phosphate was internal standard．Results：The calibration curves was linear in the range of 6～30 μg／mL for cefaclor(r=0。999 6)．The average recovery of cefaclor WaS 99．20％(n=5，RSD=2．03％ )．Conclusion：HPCE is simple，quick and sensitive．
Key words cefaclor；HPCE；determination

    头孢克洛为第2代头孢类抗生素，口服吸收完全，半衰期短，主要经肾脏排泄，临床用于治疗敏感细菌所致的呼吸道、泌尿道、皮肤软组织等感染，其胶囊、片剂、颗粒剂、混悬剂的含量测定都采用高效液相色谱法(HPLC法)，且已被2000年版《中国药典》收载。
    高效毛细管电泳法(HPCE法)是近年来发展迅速的一种新的分离分析技术，具有高效、快速、微量和易于自动化等优势，用于分析抗生素的研究已引起了人们的关注。笔者采用HPCE法测定头孢克洛胶囊中头孢克洛的含量，方法简单易行，快速、灵敏、准确，现报道如下。

1 仪器与试药
    Waters公司高效毛细管电泳仪，Waters公司石英毛细管柱(60 cm×75μm)；Millennium32数据处理系统。头孢克洛对照品(礼来苏州制药有限公司，批号：RS0316)；地塞米松磷酸钠对照品(Sigma公司)；头孢克洛胶囊(0．25 g，礼来苏州制药有限公司)；硼砂、氢氧化钠均为分析纯。

2 方法与结果
2．1 运行缓冲液配制
    精密称取5．73 g硼砂溶于500 mL超纯水中，配成30 mmol／L的硼砂电泳缓冲液，用0．1 mol／L盐酸调节pH值至9．2。
2．2 电泳操作条件
    分离电压：l2 kv；检测波长：254 nm；采用压力进样，进样压力为50 kPa，进样时间为5 s；缓冲液：30 mmol／L硼砂溶液(pH：9．2)。每次进样前用运行电泳缓冲液冲洗毛细管柱10 min，每次分析后用0．1 mol／L的氢氧化钠冲洗2 min，水冲洗10 min。所用溶液均经0．45μm纤维树脂膜过滤。根据上述电泳条件，所得电泳图见图l。
2 3 溶液配制
    精密称取头孢克洛对照品15．0 mg，置100 mL量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，配成浓度为0．15 mg／mL的头孢克洛对照品溶液。精密称取地塞米松磷酸钠对照品9．0 mg，置100 mL量瓶中，加超纯水至刻度，摇匀，配成0．09 mg／mL的地塞米松磷酸钠内标溶液。
2．4 线性关系考察
    精密吸取头孢克洛对照品溶液l，2，3，4，5 mL分置于25 mL量瓶中，再分别加内标溶液2mL，用超纯水稀释至刻度，摇匀，按上述电泳条件分别进样，以对照品浓度(1μg／mL)为横坐标(C)，头孢克洛主峰面积与内标峰面积之比为纵坐标(A)作图，得回归方程：A=0.1389C-0.0144．r=0．9996(n：5)，头孢克洛在6～30μg／mL浓度范围内线性关系良好。
2 5 精密度试验
    精密吸取头孢克洛对照品溶液2 mL置于25 mL量瓶中，用超纯水稀释至刻度，摇匀，按上述电泳条件进样，重复5次，测得头孢克洛峰面积的RSD为2．23％，表明仪器精密度良好。
2．6 稳定性试验
    将同一对照品溶液在相同电泳条件下，分别于0，2，6，8，l2．24 h重复进样，测得头孢克洛峰面积的RSD为2．12％ ，表明头孢克洛在24 h内测定结果稳定。
2．7 重复性试验
    按样品测定项下方法，对同一批号样品分别取样平行测定5次，求得含量的RSD为1、98％ ，表明重复性较好。
2．8 加样回收试验
    精密称取已测定含量的头孢克洛胶囊25 nag(约相当于头孢克洛20 mg)，置于100 mL量瓶中，加超纯水适量溶解，超声处理10 min，用超纯水稀释至刻度，摇匀，过滤。精密吸取续滤液l mL置25 mL量瓶中，加入内标溶液2 mL，再加入头孢克洛对照品溶液1．0 mL，超纯水稀释至刻度，摇匀，进样，以头孢克洛对照品峰面积与内标峰面积之比代入回归方程计算回收率。结果见表l。
2 9 样品含量测定
    取头孢克洛胶囊5批，精密称取25mg(约相当于头孢克洛20mg)，置100mI 量瓶中，加超纯水适量溶解，超声处理10min，用超纯水稀释至刻度，摇匀，过滤。精密吸取续滤液l mL，置25 mL量瓶中，加入内标溶液2 mL，用超纯水稀释至刻度，摇匀，进样，内标法计算5批样品的含量并与HPLC法测定的结果相比较，结果表明两种方法测定结果之间无显著性差异(见表2)。

3 讨论
    笔者曾比较了磷酸盐、硼酸-硼砂、硼砂3种缓冲液，发现硼砂对头孢克洛的分离最理想。研究表明缓冲液的浓度和pH值对分离具有重要影响。高浓度缓冲液可获得较好的分离，但保留时间会变长，而且导致通过毛细管的电流增加，从而增大焦耳热，因此选用30 mmol／L硼砂作缓冲液。pH值选择是决定分离成败的一大关键，采用DH为9．2的硼砂缓冲液，分析时间短，峰形尖锐、对称并达到基线分离。
    研究表明，柱温降低则分离度变好，但柱效减低，分析时间变长。综合考虑分离度和迁移行为的变化，本实验选用25℃柱温较合适。分离电压是毛细管电泳的一项重要参数，试验表明，增加组分的迁移速度是减少谱带展宽、提高分离效率的重要途径，增加电场强度可以达到提高迁移速度的目的，但高电场强度导致通过毛细管的电流增加而增大焦耳热。在l2 kV时，分离选择性最佳。
    由于高效毛细管电泳仪的进样精度低于HPLC法，重现性差，含量测定须选用内标法以克服其缺点。本研究选用地塞米松磷酸钠为内标，利用HPCE法测定了5批样品的含量，结果均符合2000
年版《中国药典》对胶囊的要求。本实验对HPLC法和HPCE法的测定结果进行了比较，两种方法测定结果无显著性差异，但HPLC法具有消耗成本高、分析时间长、有机溶剂用量大等缺点。HPCE法测定头孢克洛胶囊的含量，方法简便、准确、快速、重复性好，可为头孢克洛胶囊的质量控制提供一种便利的方法。

参考文献：
[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(二部)【M】．北京：化学工业出版社，20oO：176．
[21 Flurer C L．Analysis of antibiotics by capillary electrophoresis[]]．Electrophoresis．1997，18(12—13)：2 427—2 431．