关键词  防腐剂检测

摘要　　对于油浸食品中的防腐剂检测，国标GB/T500929-2003中没有明确规定处理与检验方法，实验室一般采用酸性乙醚萃取、浓缩，气相色谱法检测。该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标准系列线性差，最低检出限较高，对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测。本方法采用乙醇氢氧化钠混合液萃取，反相液相色谱紫外检测器检测，有效消除萃取中乳化现象，提高分析灵敏性和准确性。

　　1  仪器与试剂

　　11  主要仪器  L7000型高效液相色谱系统(日本日立HITACHI公司)，配L7420型UVVis检测器，D7000色谱数据处理系统；802型离心机(上海手术器械厂)；XK96B型快速混合器(姜堰新康医疗器械有限公司)。

　　12  试剂  苯甲酸和山梨酸标准储备液：100mg/ml(国家标准物质研究中心)；001mol/L氢氧化钠乙醇溶液;008mol/L氯化氢溶液；002mol/L乙酸铵溶液；石油醚乙醚混合液：石油醚(AR)+乙醚(AR)=3+1；甲醇：色谱纯。

　　13  仪器条件  色谱柱：Kromasil C18(250×46mm，ID5μm)；流动相：甲醇+002mol/L乙酸铵溶液=5+95；流速：10ml/mim；进样量：5μl;柱温：室温；检测波长：230nm。

　　14  方法  (1)样品处理:准确称取混匀后的样品100g于10ml的具塞离心管中，加入50ml的石油醚乙醚混合液,用快速混合器使油脂溶解。加入001mol/L氢氧化钠乙醇溶液40ml，上下振荡20次，静置15min后，在离心机中3500r/min离心5min，取下层溶液于10ml容量瓶中，按上述方法再萃取1次，合并2次萃取液，用008mol/L氯化氢溶液调节pH≈7，用双蒸水定容至10ml，混匀，取适量定容液，用045μm滤膜过滤，注入具塞小试管中，待测。同法做试剂空白。(2)标准曲线的绘制及样品测定：分别取苯甲酸和山梨酸标准储备液配制出00，100，200，500，1000，1500，2000μg/ml标准工作曲线浓度系列,在上述仪器条件下，用5μl定量环取标准及样品溶液进行液相色谱分析。以标准系列质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，样品测定结果由其峰面积经工作曲线计算得出。

　　2  结果

　　21  萃取剂的选择  利用苯甲酸和山梨酸的酸性，分别采用Na2CO3、NaHCO3、NaOH等碱性化合物配成一定浓度的萃取液，通过对样品萃取效率、时间及样品的乳化情况进行综合比较，NaOH溶液效果较好，但由于其碱性强，为减少样品萃取时的乳化及皂化，应严格控制使用的浓度。通过食品中防腐剂最大使用限量与萃取效率计算，并用不同浓度的NaOH溶液实际操作对比，浓度在001～005mol/L时效果较好。

　　22  样品的乳化与破乳  样品中含有大量的油脂，因此，在萃取过程中会产生严重的乳化现象，为有效破乳，分别采用浓硫酸除脂、氯化钠氢氧化钠混合液萃取、乙醇氢氧化钠混合液萃取、离心破乳等不同方法对同一样品进行实验，结果表明，乙醇氢氧化钠混合液萃取后再离心法破乳效果最好，使用中应注意乙醇浓度不易太高，否则将有较多的有机杂质、色素等进入萃取剂中，使色谱柱分离困难。通过对不同浓度的乙醇氢氧化钠体系萃取分离效果的对比，乙醇含量在25％～35％为最佳，离心时转速越大，时间越长，破乳率越高，一般在2000r/min以上，作用2min后，破乳率即可达100％。

　　23  萃取的效率  液液萃取是利用样品中不同组分在不混溶2种溶剂中溶解度的不同来达到分离提取的目的，要获得较高的萃取效率，可采用高分配系数的萃取剂、增大萃取剂用量、多次萃取等方法。试验用10ml萃取剂分为1次、2次、3次对同一样品萃取效率进行比较，分别为945％，983％，986%，因此，采用2次萃取即可取得满意的结果。
24方法的线性范围及检出限量  本实验的线性范围苯甲酸0～200μg/ml，r=099996，回归方程Y=17000X+7514；山梨酸0～200μg/ml，r=099997，回归方程Y=29442X+9204。取置信因子P=095，仪器噪声电平的2倍为检出限，则苯甲酸、山梨酸标准溶液的最低检出浓度为012和008μg/ml。若取样品100g，萃取后定容至10ml，则样品的最低检出浓度为苯甲酸12mg/kg，山梨酸08mg/kg。

　　25  方法的精密度和准确度  用本方法平行测定含苯甲酸、山梨酸的样品各6次。结果，苯甲酸平均含量110mg/kg，相对标准偏差(RSD)28％；山梨酸平均含量126mg/kg，相对标准偏差(RSD)32％。在样品中加入高、低2种不同浓度的标准溶液，用本法测得苯甲酸的回收率在954％～1026％之间，山梨酸的回收率在961%～1035％之间，说明本方法精密度与准确度均较高，结果可靠，见表1。

　　表1  样品加标回收率实验结果（略）

　　26  样品的分析及方法比对  采用本方法与气相色谱法同时测定不同样品中的苯甲酸(样品本底)、山梨酸(样品加标)含量，经测定结果配对t检验，表明2法对同一样品检测结果差异无统计学意义，见表2。

　　表2  2种方法测定结果比较（略）

　　注：t苯甲酸=1004,t山梨酸=1001,(t02(3)=1638),P>02

　　3  小结

　　试验结果表明，本方法的精密度和准确度较高，线性范围宽，比气相色谱检测法样品处理更简单、快速，试剂消耗少，从而减少杂质的引入，降低了空白值，提高结果的准确性，为油浸食品中的防腐剂检测提供更完善、可靠的手段。

　　参考文献

　　〔1〕  Stephen P Holland.Extraction capacity and the optimal order of extraction［J］.Journal of Environmental Economics and Management,2003，(45):569-588.

　　〔2〕  王立，汪正范，牟世芬，等.色谱分析样品处理［M］.北京：化学工业出版社，2002：48-67.

　　〔3〕  丁世林.高效液相色谱方法及应用［M］.北京：化学工业出版社，2001：283-300.

　　〔4〕  杨树勤.卫生统计学［M］.北京：人民卫生出版社，1986：24-40.