薄层扫描法测定粉萆薜和绵萆薜中薯蓣皂苷元的含量 |
| 中国色谱网(2006-11-1 9:47:01) |
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摘要：目的：利用薄层扫描法分别对薯蓣科植物粉背薯蓣及绵萆薜药材进行薯蓣皂苷元的含量测定。方法分别取粉苹薜、绵萆薜各3批经提取后点样，以氯仿：丙酮(9.7：0.3)为展开剂，采用薄层扫描法，检测波长λs=480nm，λR=700nm。结果平均回收率为100.1％和99.64％，RSD为1.42％和2.10％，稳定实验RSD=2.26％。结论本方法方便、简单、准确，可用于该品种的质量控制。
粉萆薜和绵萆薜均为少常用中药《中国药典>2000年版有收载。粉萆藓为薯蓣科植物粉背薯蓣Dioicorea hypoglauca Palibin的干燥根茎。具有利湿去浊，祛风除痹之功效。用于膏淋，白浊，白带过多，风湿痹痛，关节不利，腰膝疼痛。绵萆薜为薯蓣科植物绵萆藓Dioscorea sepemloba Thunb的干燥根茎。具有利湿去浊，祛风痛通痹之功效，用于淋病白浊，白带过多，湿热疮痛，腰膝痹痛。二者均为秋冬二季采挖，除去须根，洗净，切片，晒干。
1 仪器与材料
CS-9301PC型薄层色谱扫描仪(日本岛津公司)；939型薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)；定量点样毛细管(USA Drummond Scientific Co．)；硅胶G(青岛海洋化工有限公司)；羧甲基纤维素钠(上海化学试剂采购供应站)；薯蓣皂苷元(中国药品生物制品检定所200001含量测定用)；粉萆薜和绵萆薜均由广西中医药研究所赖茂祥副研究员鉴定后提供。所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 对照品溶液的制备：精密称取经80℃干燥至恒重的薯蓣皂苷元约10mg，加甲醇溶解，并制备成每lml含薯蓣皂苷元0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
2．2 试品溶液的制备：取供试品粉萆薜25g，绵萆薜10.0g，加21ml／L的盐酸50ml加热回流3小时使其水解冷却过滤，药渣用水洗至中性。置80℃干燥。干燥物置索氏提取器中，用石油醚(60～90℃)30ml水浴加热回流4h将石油醚挥干后，加甲醇于残渣中并定量转移到50.0ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。作为供试品溶液。
2．3 色谱系统：以0.5％CMC-Na为粘合剂的硅胶G薄层板。展开剂为氯仿-丙酮(9.7：0.3)，展距10cm，展开后迅速吹干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，取出，立即在薄层板上覆盖上同样大小的玻板，周围以封口胶封好。
2．4 扫描参数：将薯蓣皂苷元对照品溶液，绵萆薜，粉萆薜和空白溶液点于同一块薄层板上，依法展开显色后对斑点进行波长扫描，结果在480nm波长处均有最大吸收，空白无干扰，故确定检测波长为480nm，参比波长为?00nm。扫描方式：双波长，反射法，线性扫描，狭道0.4xl0.0nm，线性参数SX=3。
2．5 标准曲线与线性范围：用定量毛细管吸取薯蓣皂苷元对照品溶液1、2、3、4、5μl，分别点于同一块板上，依法展开，显色，按上述条件进行试验，记录峰面积分值，以斑点的峰面积分值为纵坐标，点样量(μg)为横坐标，数据见表1，绘制标准曲线，其回归方程为Y=372.83X十63.339，r=0.999。结果表明，点样量在0.5—2.5μg之间有良好的线性关系。因截距不为零，故采用两点校正法。
2．6 样品测定：精密吸取供试品溶液粉萆薜lμl，绵萆薜3μl，对照品溶液1.3μl，分别交叉点于同一块薄层板上，依法展开，显色，扫描得出供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，以外标两点法计算供试品中薯蓣皂苷元的含量。
2．7 精密度试验：精密吸取对照品溶液2μl共6份，分别点于同一薄层板上，依法展开，显色，扫描。测得同板6点同浓度吸收度积分值，RSD=1.21％(n=6)，另取6块硅胶CMC—Na薄层板，分别点对照品溶液2μl，依法测得异板同浓度吸收度积分值，RSD=2.03％(n=6)。
2．8 稳定性试验：取同批号的供试品溶液，依法点样，展开，显色，封好在0.5、1、2、4、8、12小时内进行扫描，记录色斑吸收度积分值，在12小时内基本稳定，RSD=1.27％(n=6)。
2．9 加样回收试验：称取已知含量的绵萆薜和粉萆薜各3份，分别精密加入薯蓣皂苷元，按供试品溶液制备方法制备，再按样品测定方法进行点样，展开，显色，扫描，并计算回收率。
3 讨论
3．1 展开剂的选择：实验证明，展开剂以氯仿-丙酮(9.7：0.3)最为适宜，因氯仿极性比丙酮小，而丙酮在整个展开剂中起到调节比移值的作用，故丙酮比例过大或过小都会影响各斑点的分离，使斑点不清晰或有拖尾的现象。
3．2 近年来，对粉萆薜和绵萆薜中薯蓣皂苷元含量测定研究的报告较少，有利用反相高效液相色谱法四，而本方法方便、简单、准确，可用于该品种的质量控制。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员，中国药典，一部，北京：化学工业出版社，2000：237，271
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信息来源：网上收集
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