活血通络颗粒是由黄芪、丹参、当归、赤芍、地龙、川芎等多味中药组成的复方制剂，具有益气活血、抗凝、降脂等功效。主要用于中风后遗症、脑血栓、脑动脉硬化及高血压、高血脂、心绞痛等心脑血管疾病。黄芪为方中君药，黄芪甲苷为其指标成分，中药复方中黄芪甲苷含量测定已有文献报道。本研究参考文献方法，建立测定活血通络颗粒中黄芪甲苷含量的方法，为控制本品质量打下基础。
1 仪器与试药
薄层扫描仪(日本岛津CS一9000)，硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂，10cm×10cm)，定样毛细管(美国Drumond公司)，电子分析天平(梅特勒一托利多仪器上海有限公司)，黄芪、丹参、当归等原料药(医药公司)，黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所)，活血通络颗粒剂(本院自制，批号20020326，20020410，20020419)。所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 供试品溶液的制备 精密称取本品25g，置100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，使其充分溶解，抽滤。滤液浓缩到50mL，精密吸取20mL，用石油醚(25，25，25，25mL)萃取4次，弃去醚液，水层再用水饱和正丁醇萃取4次(30，30，20，20 mL)，合并4次萃取液用氨水振摇萃取2次，每次5 mL，弃去氨液，水浴挥去正丁醇，残渣加水10mL溶解，放冷，通过D101型大孔树脂(内径1.5cm，长12cm)，以水70mL洗脱，弃去水液，再用30％乙醇30 mL洗脱，弃去乙醇洗脱液，用70％的乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移到2 mL量瓶中定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．2 对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1g/L的溶液，作为对照品溶液。
2．3 薄层条件和扫描条件硅胶G薄层板，110℃活化1 h；以氯仿-甲醇-水(13：6：2)的混合溶剂(在10℃以下放置过夜)下层为展开剂；显色剂为10％的硫酸乙醇；显色后在105℃烘6 min，立即用同样大小的玻璃覆盖，周围用胶布密封固定备用。双波长反射锯齿形扫描；扫描波长λs=530nm，λR= 700nm，狭缝0.4mmx 0.4mm，SX=3。灵敏度中。
2．4 线性关系考察 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液1，2，3，4，5μL点于同一硅胶G薄层板上，晾干，显色，按上述条件扫描测定。以点样量(X)为横坐标，斑点峰面积积分值(Y)为纵坐标，结果表明黄芪甲苷在1.00～5.00μg线性关系良好，计算得回归方程Y=3876.59X+779.49，r=0.9926。
2．5 精密度实验 精密吸取黄芪甲苷对照品2μL，点样，展开，对黄芪甲苷同一斑点重复扫描5次，测定其峰面积积分值，得平均值为8735.309，RSD为2.3％(n=5)表明仪器精密度较好；在同一板上点5个相同量的对照品溶液，测其峰面积并求平均值为11074.05，RSD为3.7％(n=5)。表明同板精密度较好。
2．6 稳定性实验 精密吸取黄芪甲苷对照品1μL，点于薄层板上，展开，显色，每隔30 min测定1次斑点的峰面积积分值，共测定5次，结果表明黄芪甲苷显色后在2.5h内稳定，RSD=2.7％。
2．7 重复性实验 取同一批供试品6份(批号为20020410)，分别进行测定，含量的RSD：4.2％，表明本法有良好的重复性。
2．8 样品的测定精密吸取供试品溶液6μL，对照液2，3μL点于薄层板上依法展开，显色，扫描测定，用外标法计算3批样品中黄芪甲苷的含量及RSD。
2．9 加样回收率实验 精密取已知含量的样品适量，加一定量的黄芪甲苷对照品溶液，制备供试品溶液，点样展开，显色，按上述测定方法测定。
3 讨论
活血通络颗粒剂由多味中药组成，成分比较复杂，以HPLC测定，干扰较多，不易检测出。本试验提取方法简便，能有效控制本品的质量。
本法对样品的提取可有效除去辅料中所含杂质，使得薄层斑点清晰，色带干扰少，且扫描基线稳定，重现性好。实验中，对薄层板得活化处理要求严格。实验表明在110℃活化1h为宜。对于展开剂，经多次比较以氯仿一甲醇．水(13：6：2)为最佳。用硫酸乙醇显色后应立即覆盖玻璃。《中国药典}2000年版一部测定黄芪中黄芪甲苷含量用薄层扫描法，其中用40％的乙醇洗脱，可洗去部分黄芪甲苷，对含量测定造成影响。本实验采用30％的乙醇洗脱，效果令人满意。
实验结果表明无糖型活血通络颗粒剂用薄层扫描法测定黄芪甲苷含量的方法比较简便、准确，可以用来对其进行质量控制。
[参考文献]
[1] 王旭，周富荣．薄层扫描测定隆必消胶囊中黄芪甲甙的含量．中国中药杂志．1999，24(5)：285．
[2] 赵汝海，杜劲松．双波长薄层扫描法测定胃安康口服液中黄芪甲甙和延胡索乙素的含量．解放军药学学报，1999，15(5)：46．