摘 要 目的：建立IP-HPLC测定复方赖氨酸颗粒剂中维生素B1和维生素B6含量的方法。方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-水相(辛烷磺酸钠0.32g,三乙胺2ml,
冰醋酸10ml, 加水至1 000ml)(13:87)为流动相,检测波长为280nm。结果：两成分的线性关系良好;6次测定的平均回收率±RSD,维生素B1为100.58%±0.50%,维生素B6为99.98%±0.74%。结论：本法可用于同时测定复方赖氨酸颗粒剂中维生素B1和维生素B6含量。
关键词 离子对色谱法;维生素B1;维生素B6;复方赖氨酸颗粒剂
中图分类号 R914.1
SIMULTANEOUS DETERMINATION
OF VITAMIN B1 AND VITAMIN B6IN COMPOUND L-LYSINE GRANULES BY IP-HPLC Miao Huizhu,Liu Yubo,Liu Yan’e
(Institute for Drug and Instrument Control of PLA,Beijing 100071) Absract AIM To establish
a method using ion-pair HPLC for the determination of Vitamin B1 and Vitamin B6
in compound L-lysine granules.METHODS The assay was conducted on a YWG-C18
coliu with acetonitrile-buffer solution (mix 0.32g sodium 1-octanesulfonate, 2ml
triethylamine and 10ml glacial acetic acid,and adding water to 1000 ml)(13:87) as mobile
phase. The detection wavelength was 280 nm.RESULTS Satisfactory linearity
and accuracy were obtained,with the recoveries (n=6) as follows: Vitamin B1,100.58%
(RSD±0.50%); Vitamin B6,99.98%(RSD±0.74%)。CONCLUSION The ion-pair HPLC method may
be used for the simultaneous determination of Vitamin B1 and Vitamin B6
in compound L-lysine granules.
Key words ion-pair HPLC;Vitamin B1;Vitamin
B6;compound L-lysine granules 复方赖氨酸颗粒剂是由盐酸赖氨酸、维生素B6、维生素B1和葡萄糖酸钙等4种成分组成的复方制剂,每g中含维生素B1(Vitamin
B1,简称VB1)和维生素B6(Vitamin B6,简称VB6)分别仅为0.0035及0.002g。由于VB1和VB6含量少及多种成分共存,不能采用一般的容量分析、紫外分光光度法测定。根据颗粒剂组成的色谱行为,将其用水溶解,用反相离子对色谱法同时测定颗粒剂中VB1和VB6两组分含量［1、2、3］。 1 材料与方法
1.1 仪器与试药 (1)岛津LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津制作所);SPD-6AV紫外检测器;CR-3A系列处理机;色谱柱YWG-C18(200×4mm),10μm,(大连物理化学研究所)。(2)VB1、VB6对照品及复方赖氨酸颗粒剂(南宁邕江制药厂，颗粒剂批号
980206，980209，980210);辛烷磺酸钠(Sigma公司提供);乙腈,色谱纯;超纯水;其余试剂为分析纯。
1.2 色谱条件 流动相 乙腈-水相(辛烷磺酸钠0.16g,三乙胺1.0ml,冰醋酸5.0ml,加水至500ml,必要时调节pH值为3.6)(13:87)。流速1.0ml.min-1,
柱温35℃,进样20μl。
1.3 方法 (1)柱效和分离度 以上条件测定B1和B6对照品溶液HPLC色谱图,理论板数按维生素B6峰计为2404,维生素B1和B6峰分离度为4。重复进样,RSD小于2.0%。(2)测定波长的选择 配制VB1水溶液(17.5μg.ml-1)及VB6水溶液(10μg.ml-1),分别绘制紫外吸收光谱图(见图1)。选择两成分吸收曲线交叉点附近的280nm波长处，作测定波长。 
图1 VB1和VB6紫外吸收光谱图
--VB1 ─VB6 2 结 果
2.1 线性关系 取VB1和VB6对照品适量,精密称定,用水配制成浓度分别为0.035和0.020mg.ml-1的对照贮备液。精密量取贮备液0.2、0.5
、1.0、1.5、2.0ml,分别置于10ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。精密量取20μl,注入液相色谱仪,以样品测定条件进行高效液相色谱测定,记录色谱图(见图2)。 
图2 VB1和VB6 HPLC色谱图
a 空白 b 对照品 c 样品 以峰面积A对浓度C进行回归,结果见表1。 表1 VB1 VB6线性试验结果 |
| VB1 | VB6 | | 峰面积A | 浓度(c/mg.ml-1) | 峰面积A | 浓度(c/mg.ml-1) | | 40 794 | 6.908×10-3 | 42 232 | 4.07×10-3 | | 109 776 | 17.27×10-3 | 111 222 | 10.175×10-3 | | 238 527 | 34.54×10-3 | 232 936 | 20.35×10-3 | | 367 838 | 51.81×10-3 | 351 928 | 30.525×10-3 | | 495 512 | 69.08×10-3 | 457 682 | 40.70×10-3 |
回归方程(VB1)
C=1.359×10-7A+1.884×10-3
r=0.999 9
线性范围 6.91～69.1×10-3mg.ml-1
回归方程VB6
C=8.734×10-8A+2.712×10-4
r=0.999 7
线性范围 4.07～40.7×10-3mg.ml-1 2.2 空白样品测定 按处方配制除待测两组份外的空白样品,按样品测定方法进行高效液相色谱测定。结果在VB1与VB6峰位置无峰出现(见图2)，证明颗粒剂中其他组分和辅料不干扰测定。
2.3 稳定性实验 取样品溶液(批号 980206),放置不同时间按法测定VB1和VB6含量(进样前滤过),以考察本品溶液在24h内稳定情况,结果(见表2)在24h内测定基本一致,表明本品溶液在24h内稳定。 表2 VB1 VB6稳定性测定结果(%) |
| 药 品 | 时间(h) | | 0 | 4 | 8 | 24 | | VB1 | 93.5 | 92.0 | 95.9 | 94.0 | | VB6 | 93.0 | 92.4 | 91.9 | 93.3 |
2.4 最小检测量 取VB1与B6对照品,精密称定,分别配制并稀释溶液,经HPLC测定,记录色谱图,使VB1与VB6峰高为仪器响应噪声的3倍量。测得VB1最小检测量为2.1×10-3μg；VB6的最小检测量为4.9×10-4μg。
2.5 回收率测定 按处方组成配制除待测组分外的空白样品,称取约1g,置于100ml量瓶中,分别精密加入VB1和VB6各适量。按样品测定法测定,将测得量与添加量计算得回收率，结果见表3。表3 VB1和VB6回收率试验结果 |
| 药品 | 加入量
(mg) | 测得量
(mg) | 回收率
(%) |  ±s
(%) | RSD
(%) | VB1 | | | 1 | 2.763 | 2.780 | 100.61 | | | | 2 | 2.763 | 2.786 | 100.84 | | | | 3 | 3.454 | 3.451 | 99.92 | 100.58±0.50 | 0.50 | | 4 | 3.454 | 3.467 | 100.37 | | | | 5 | 4.145 | 4.203 | 101.39 | | | | 6 | 4.145 | 4.160 | 100.35 | | | VB6 | | | 1 | 1.575 | 1.568 | 99.56 | | | | 2 | 1.575 | 1.567 | 99.49 | | | | 3 | 1.969 | 1.974 | 100.25 | 99.98±0.74 | 0.74 | | 4 | 1.969 | 1.955 | 99.29 | | | | 5 | 2.363 | 2.394 | 101.31 | | | | 6 | 2.363 | 2.363 | 100.00 | | |
| 2.6 精密度试验 取VB1和VB6对照品溶液,按法测定,共进样5次，结果(见表4)精密度良好。 表4 VB1 VB6测定方法精密度试验结果 |
| 序 号 | 峰面积 | | VB1 | VB6 | | 1 | 187 942 | 166 821 | | 2 | 193 544 | 166 548 | | 3 | 190 724 | 165 909 | | 4 | 192 207 | 167 840 | | 5 | 192 864 | 168 542 | | 191 456 | 167 132 | | RSD(%) | ±1.16% | ±0.63% |
| 2.7 重现性试验 取本品约1g,5份,精密称定,分别置于5个100ml量瓶中。加水60ml,超声10min,加水使至刻度,摇匀。双层滤纸滤过为供试品溶液。以下同样品测定项下操作,计算。结果见表5。 表5 VB1 VB6含量测定重现性试验结果 |
| 序 号 | 含 量 | | VB1(%) | VB6 (%) | | 1 | 97.8 | 93.9 | | 2 | 96.2 | 93.2 | | 3 | 95.8 | 95.1 | | 4 | 98.4 | 94.3 | | 5 | 97.1 | 95.0 | | 97.1% | 94.3% | | s | ±1.08% | ±0.79% | | RSD | 1.11% | 0.84% |
2.8 样品测定 照高效液相色谱法(中国药典1995年版二部附录VD)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-水相(辛烷磺酸钠0.32g,三乙胺2ml,冰乙酸10ml,加水至1
000ml,必要时用三乙胺或冰乙酸调节使pH值为3.6)(13:87)为流动相,流速1ml.min-1,检测波长为280nm。理论塔板数按VB6峰计算应不低于2
000,VB1峰与VB6峰分离度应符合要求。
对照品溶液的制备 取VB1与VB6对照品各约35mg和20mg,精密称定,同置于100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取溶液10ml置100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物,混合均匀,精密称取约1g于100ml量瓶中。加水约60ml,超声5～10min,加水至刻度,摇匀。测定前滤过,取续滤液即得。
测定法 分别取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。分别测定3批样品VB1和VB6的含量,测定结果见表6。表6 VB1 VB6样品含量测定结果(n=2) |
| 批 号 | VB1(%) | VB6(%) | | 980206 | 93.5 | 92.9 | | 980209 | 95.6 | 94.6 | | 980210 | 96.4 | 93.9 |
3 讨 论
3.1 本颗粒剂中有辅形剂羧甲基纤维素钠、淀粉等,因此，水溶液(1→100)滤过后容易产生混浊或沉淀物。为使进样时的溶液澄明,建议供试品溶液应在测定前滤过。
3.2 VB1和VB6均为水溶性药物,由于本品中含量很少,因此，测定时能否溶出十分重要。建议配制供试品溶液时超声5～10min,使溶出完全。作者简介：苗惠珠，女，主任药师。国家进口药品审评委员，全军新药审评委员会委员。 作者单位：中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所 北京 100071 参考文献：
1 陆帼蓉，王桂珍.RH-HPLC法测定复合维生素B片中VB1 VB2
VB6和烟酰胺的含量.中国药科大学学报，1995；26(3):177
2 韩俊，徐育川.离子对液相色谱法测定活络灵胶囊中非那宗、VB1和VB6的含量.药物分析杂志，1997；17(2):97
3 毛舜元，杨观兆，施辛等.高效液相色谱法测定多种维生素含量.药物分析杂志，1995；15(2):25 (本文编辑 刘贺之) 收稿日期：1998-11-18
修改日期：1998-12-04 |
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信息来源：中国色谱网
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