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诊状 |
可能的原因 |
解 决 方 法 |
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(一)
保留时间变化
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1.柱温变化 |
柱恒温 |
| 2.等度与梯度间未能充分平衡 |
至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 |
| 3.缓冲液容量不够 |
用>25mmol/L的缓冲液 |
| 4.柱污染 |
每天冲洗柱 |
| 5.柱内条件变化 |
稳定进样条件,调节流动相 |
| 6.柱快达到寿命 |
采用保护柱 |
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(二)
保留时间缩短 |
1.流速增加 |
检查泵,重新设定流速 |
| 2.样品超载 |
降低样品量 |
| 3.键合相流失 |
流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向 |
| 4.流动相组成变化 |
防止流动相蒸发或沉淀 |
| 5.温度增加 |
柱恒温 |
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1.流速下降 |
管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 |
| 2.硅胶柱上活性点变化 |
用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 |
| 3.键合相流失 |
同前(二)3 |
| 4.流动相组成变化 |
同前(二)4 |
| 5.温度降低 |
同前(二)5 |
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(四)
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1.样品体积过大 |
用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% |
| 2.样品溶剂过强 |
采用较弱的样品溶剂 |
| 3.柱塌陷或形成短路通道 |
更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 |
| 4.柱内烧结不锈钢失效 |
更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 |
| 5.进样器损坏 |
更换进样器转子 |
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1.进样阀残余峰 |
每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 |
| 2.样品中未知物 |
处理样品 |
| 3.柱未平衡 |
重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱) |
| 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) |
每天新配,用抗氧化剂 |
| 5.水污染(反相) |
通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 |
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(六)
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1.气泡(尖锐峰) |
流动相脱气,加柱后背压 |
| 2.污染(随机噪声) |
清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂 |
| 3.检测器灯连续噪声 |
更换氘灯 |
| 4.电干扰(偶然噪声) |
采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等) |
| 5.检测器中有气泡 |
流动相脱气,加柱后背压 |
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1.柱超载 |
降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 |
| 2.峰干扰 |
清洁样品,调整流动相 |
| 3.硅羟基作用 |
加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品 |
| 4.同前(四)4 |
同前(四)4 |
| 5.同前(四)3 |
5.同前(四)3 |
| 6.死体积或柱外体积过大 |
连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 |
| 7.柱效下降 |
用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱 |
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(八)
峰展宽 |
1.进样体积过大 |
同(四)1 |
| 2.在进样阀中造成峰扩展 |
进样前后排出气泡以降低扩散 |
| 3.数据系统采样速率太慢 |
设定速率应是每峰大于10点 |
| 4.检测器时间常数过大 |
设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10% |
| 5.流动相粘度过高 |
增加柱温,采用低粘度流动相 |
| 6.检测池体积过大 |
用小体积池,卸下热交换器 |
| 7.保留时间过长 |
等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱 |
| 8.柱外体积过大 |
将连接管径和连接管长度降至最小 |
| 9.样品过载 |
进小浓度小体积样品 | |
信息来源：大连依利特
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